这两个生物实验怎么做？

一、目的要求：

1、  初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。

2、  探索叶绿体中有几种色素。

二、材料用具：

新鲜的绿色叶片（如菠菜叶片）。干燥的定性滤纸，烧杯（100ML），研钵，小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿，药勺，量筒（10ML），天平。丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。

三、实验原理：

1、  叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以用丙酮提取叶绿体中的色素。

2、  层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的深解度不同：深解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。这样，几分之后，叶结体中的色素就在扩散中分离开来。

四、方法步骤：

1、提取色素：

（1）称取5克绿色叶片并剪碎

（2）加入少许SiO2、CaCO3和5的丙酮

→充分研磨 →漏斗过滤→色素

（3）滤液收集到试管并棉塞封口

2、制备滤纸条

（1）将干燥处理过的定性滤纸剪成长6㎝、宽1㎝的滤纸条，并在一端剪去两角；

（2）干燥处理，重复2——3次。

3、画滤液细线

（1）用毛细吸管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地画一条滤液线。

（2） 干燥处理，重复画2——3次。

4、层析色素

（1）将3ML层析液倒入烧杯。

（2） 将滤纸条略微斜靠烧杯内壁（有滤液细线的一端朝下），轻轻插入层析液中。

（3）用培养皿盖盖上烧杯。

五、观察结果滤纸条上出现四条宽度，颜色不同的色素带，从上到下依次是：橙黄色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素a、黄绿色的叶绿素b

注意事项：

1、选材时要注意选取新鲜、颜色深的叶片。

2、用丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨时要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，减少有机溶剂的挥发。

3、在研磨时加入少许SiO2，目的是为了研磨得充分；加入少许CaCO3的目的是为了防止研磨时叶绿体中色素受到破坏；加入丙酮的目的是作为叶绿体中色素的溶剂。

4、在制备滤纸条时，要剪去两角，这是为了使色素带整齐；要在距离去两角的一端1㎝处画一铅笔细线，其目的是起标记作用，以便使每次重复画的滤液细线在同一位置，画滤液细线要重复2——3次，是为了增加色素的含量，使实验交得明显。

5、分离色素时，一是不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。

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一、目的要求：

1、  初步学会观察植物细胞质壁分离与复原的方法。

2、  理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、材料用具：

紫色的洋葱鳞片叶。刀片，镊子，滴管，载玻片，盖玻片，吸水纸，显微镜。质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液，清水。

三、实验原理：

当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁伸缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开来，也就是逐渐发生了质壁分离。

当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

四、方法步骤：

1、制作洋葱鳞片叶表皮的临时装片：

选取洋葱鳞片叶外表皮紫色较深的部位，用刀片划一个0.7cm见方的小块，用镊子尖插入平行于根侧的一个边，紧紧捏住这侧整个边缘部分，然后稍用力慢慢撕取，将捏住的较厚的部分表皮用刀片切去，剩余部分展平于载玻片中央的水滴中盖上盖玻片，即制成临时装片。

2、观察植物细胞的质壁分离与复原现象。

（1）观察洋葱表皮细胞

用显微镜观察，可以看到洋葱鳞片叶表皮细胞中紫色的中央液泡，还可以看到原生质层紧紧地帖着细胞壁。

  （2）观察洋葱表皮细胞的质壁分离

    从盖玻片的一侧滴入蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，盖玻片下面的洋葱鳞片叶表皮就浸润在蔗糖溶液中。用高倍镜观察，可以看到细胞中的中央液泡逐渐变小，原生质层逐渐与细胞壁分离开来。

  （3）观察洋葱表皮细胞的质壁分离复原

    从盖玻片的一侧滴入清水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，盖玻片下面的洋葱鳞片叶表皮就浸润在清水中。用高倍镜观察，可以看到细胞中的中央液泡逐渐胀大，原生质层又逐渐贴着细胞壁。

注意事项：

（1）    选材应选择活的紫色洋葱鳞片叶表皮，最外层表皮中，有的细胞壁虽含有大量的紫色花青素，但死亡的细胞太多，内表皮细胞的液泡中花青素少呈无色，都不能选用。另外，新鲜的水绵、黑藻叶、紫鸭跖草等也是经常使用的材料。

（2）    在取洋葱鳞片表皮时，要注意不要让表皮细胞中的液泡破损，如果破损实验不会成功。判断液泡是否破损的依据是：完整的、液光未破的洋葱鳞片叶表皮是紫红色的，而液泡破损的表皮是无色半透明的。

（3）    本试验选用的蔗糖溶液，浓度过高，质壁分离速度快，但会影响到细胞的活力，严重时可能导致细胞失水过多而死亡。如果浓度过低，分离速度过慢，甚至不发生分离。