固相萃取前,为什么要对填料进行平衡调节

常 用 固 相 萃 取 程 序
反相填料——此类填料中包括应用最为广泛的反相填料C18。另外,C8,C2环已基和苯基键合相也有供应,并提供不同的选择性。一般来说,非极性到中等极性化合物在极性基质中保留于反相填料上。此种填料要求在使用前以有机溶剂和随后的水溶液进行平衡调节。中等极性化合物的洗脱通常采用甲醇,对于非极性的化合物的洗脱则需要极性更低的溶剂。

反相SPE操作步骤:
A、调节
先用3-5ml甲醇冲洗填料。再用3-5ml水或缓冲液冲洗填料。在上样前请勿让填料流干。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1-5mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留,请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留,使用极性溶剂将弱保留干扰物冲洗下来。
D、洗脱
使用1-2mL的非极性溶剂将所需化合物洗脱。收集样品用于分析。

正相填料——硅胶,Florisil,氨基,氰基,双醇基和氧化铝均有供应。正相填料保留溶于非极性介质中的极性化合物。使用非极性溶剂调节平衡,采用极性更大的溶剂洗脱。碱性化合物均保留于硅胶填料上,极性非常强的化合物(如碳水化合物)将不可逆地保留于硅胶填料。在此情况下,双醇基或氨基键合相是更好的选择。

正相SPE操作步骤:
A、调节
用3-5mL非极性溶剂冲洗填料。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1-5mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留,请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留,使用非极性溶剂将弱保留的干扰物冲洗下来。

固相萃取四步骤

弃去 弃去 弃去 收集分析

D、洗脱
使用1-2mL的极性溶剂将所需化合物洗脱。收集样品用于分析。

离子交换填料——强阴离子(SAX)和强阳离子(SCX)交换基均有供应。样品中阴/阳离子分别和树脂上的阴/阳离子交换使得阴/阳离子保留于相关树脂上。洗脱采用高离子强度的缓冲液(0.1M—0.5M),或者通过改变淋洗液的pH使得样品中化合物不再带电荷。这些树脂的骨架通常为苯乙烯—二乙烯基苯共聚物,样品中有机溶剂含量的增加将会导致交换容量的降低。

离子交换SPE操作步骤:
A、调节
用5mL去离子水或低离子强度的缓冲溶液(0.001M—0.01M)冲洗填料。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1—2mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留,请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留,使用去离子水或低离子强度的缓冲溶液将弱保留的干扰物冲洗下来。
D、洗脱
使用1-5mL的高浓度的盐溶液(0.1—0.5M)将所需化合物洗脱,或改变洗脱缓冲液的pH使得样品化合物不再离子化。收集样品用于分析。